花青素作为一种天然食用色素，安全、无*、资源丰富，而且具有一定营养和药理作用，在食品、化妆品、医药等方面有着巨大的应用潜力。
自然界有超过种不同的花青素。他们来源于不同种水果和蔬菜如紫甘薯、越橘、酸果蔓、黑枸杞、蓝莓、葡萄、接骨木红、黑加仑、紫胡萝卜和红甘蓝、颜色从红到蓝。这些花青素主要包含飞燕草素（Delchindin）、矢车菊素（Cyanidin）、牵牛花色素（Petunidin）、芍药花色素（Peonidin）。
1范围
本标准规定了植物源性食品中的飞燕草色素、矢车菊色素、矮牵牛色素、天竺葵色素、芍药素和锦葵色素共6种花青素的高效液相色谱测定方法。
本标准适用于植物源性食品中花青素含量的测定。
本标准的检出限:以称样量为1g，定容体积为50mL计，飞燕草色素、矢车菊色素、天竺奏色素、芍药素和锦葵色素5种花青素的检出限均为0.15mg/kg;矮牵牛色素的检出限为0.5mg/kg。同样条件下定量限:飞燕草色素、矢车菊色素、天竺葵色素、芍药素和锦葵色素5种花青素均为0.5mg/kg;矮牵牛色素为1.5mg/kg。
2规范性引用文件
下列文件对于本文件的应用是必不可少的。凡是注日期的引用文件，仅注日期的版本适用于本文件。凡是不注日期的引用文件，其 版本(包括所有的修改单)适用于本文件。
GB/T.1测量方法与结果的准确度(正确度与精密度)第1部分:总则与定义GB/T.2测量方法与结果的准确度(正确度与精密度)第2部分:确定标准测量方法重复性与再现性的基本方法
GB/T分析实验室用水规格和试验方法
3原理
植物源性食品中的花青素主要以花色苷的形式存在。试样经乙醇一水的强酸溶液超声提取花色苷后，经沸水浴将花色苷水解成花青素，用高效液相色谱法测定，以保留时间定性，外标法定量。
4试剂和材料
除非另有规定，仅使用分析纯试剂。水为GB/T规定的一级水。
4.1无水乙醇(C2H5OH):色谱纯。
4.2 (CH2Oz):色谱纯。
4.3 (CH3OH):色谱纯。
4.4 (HCl):优级纯。
4.5提取液:无水乙醇+水+ =2+l+l(V+V+V)，取mL无水乙醇、lOOmL水和lOOmL 混匀。
4.% 溶液(体积比)：取10mL 、90mL 混匀。
4.7飞燕草色素(Delphinidin):CAS号-53-0，纯度≥96%。
4.8矢车菊色素(Cyanidin):CAS号-58-5，纯度≥98%。
4.9矮牵牛色素(Petunidinchloride):CAS号-30-7,纯度≥96%。
4.10天竺葵色素(Petunidin):CAS号-04-3，纯度≥96%。
4.11芍药素(Peonidin):CAS号-01-0,纯度≥98%。
4.12锦葵色素(Malvidin):CAS号-84-5,纯度≥96%。
4.13单标储备溶液
分别准确称取飞燕草色素(Delphimdin)、矢车菊色素(Cyanidin)、矮牵牛色素(Petunidinchloride)、天竺葵色素(Pelargomdin)、芍药素(Peonidm)和锦葵色素(Malvidin)共6种花青素标准品5.0mg，用10% 溶液(4.6)溶解并分别定容至10mL容量瓶中，即为mg/L的单标储备液，于-18°C下，贮存于密闭的棕色玻璃瓶中，保存有效期为6个月。
4.14混合标准使用液
在使用中将单一标准储备液进行混合后，用10% 溶液(4.6)作为溶剂，并逐级稀释成0.5mg/L、l.0mg/L、5.0mg/L、25.0mg/L、50.0mg/L或其他浓度的花青素混合标准使用液。在4℃条件下，有效期为6个月。
4.15滤膜:0.45μm，水相滤膜。
5仪器与设备
5.1高效液相色谱仪带
紫外或二极管阵列检测器。
5.2天平:精度0.01mg，0.01g。
5.3水浴锅:精度±2℃。
5.4匀浆机。
5.5超声波清洗机。
5.6粉碎机。
6分析步骤
6.1试样制备
采用四分法分取样品，含水率高的样品，如葡萄、茄子等，取约g于匀浆机中匀浆;含水率低的样品，如黑米、黑豆等，用粉碎机进行粉碎，过的筛。所有样品在-18°C条件下保存。
6.2提取
根据样品中花青素含量，称取样品1.00g10.00g于50mL具塞比色管中，加人提取液(4.5)定容至刻度，摇匀1min后，超声提取30min。
6.3水解
超声提取后，于沸水浴中水解1h，取出冷却后，用提取液a5)再次定容。静置，取上清液，用0.45水相滤膜过滤，待测。样品制备好后，在4°C条件下，保存时间不超过3d。
6.4测定
6.4.1色谱参考条件
a)色谱柱:C18柱,mm×4.6mm×5μm或性能相当者;
b)流动相A为含1% 水溶液，流动相B为含1% 乙腈溶液;
c)检测波长:nm;
d)柱温:35°C;
e)进样量:20μL;
f)梯度洗脱条件，见表1。
时间，min流速，mL/min流动相A，％流动相B，％
0.00..08.0
2.00...0
5.00.
10.00...0
...0
.
.
20.00.
..08.0
.8.0
6.4.2色谱分析
分别将标准溶液和试样溶液，注人液相色谱仪中，以保留时间定性，以样品溶液峰面积与标准溶液峰面积比较定量。色谱图参见附录A。
7结果计算
样品中花青素含量为6种花青素含量之和。其含量以质量分数w计，单位为毫克每千克(mg/kg)，按式⑴计算。
8精密度
本标准精密度数据是按照GB/T.1和GB/T6耵9.2的规定确定的，获得重复性和再现性的值是以95%的置信度来计算。本标准方法的精密度数据参见附录B。
附录A
(资料性附录)
花青素检测